Método de cuenta de placa aeróbica
Fecha y hora de publicación: 2020-09-25, 16:28
Fecha y hora de modificación: 2021-05-07, 16:30
Autor: Food-Men
Este artículo presenta el método de cuenta de placa aeróbica en alimentos y la producción de medio de cuenta de placa aeróbica para satisfacer las necesidades de pruebas microbianas en alimentos.
1. Principio del método de cuenta de placas de bacterias aeróbicas
Las bacterias son tan pequeñas que son difíciles de ver a simple vista. Pero después de que se cultivan, crecen de una sola bacteria a una colonia, y estas colonias son fáciles de ver y contar. Al calcular los microorganismos presentes en un alimento, el alimento primero se homogeneiza. A partir de la concentración de muestra original, agregue la solución de dilución una por una para diluir la muestra, diluir 10 veces cada vez. Antes y después de cada dilución, tome la muestra diluida e inyéctela uniformemente al medio de placa. Luego, los microorganismos se cultivan bajo ciertas condiciones (como un medio adecuado, oxígeno, temperatura, tiempo, pH, etc.), y se calcula el número de colonias en el medio de placa. El número de colonias puede reflejar el contenido de microorganismos aeróbicos y el grado de contaminación microbiana en los alimentos. Este método de cultivo y cuenta de microorganismos aeróbicos en los alimentos se denomina "cuenta de placa aeróbica". El método de cuenta de placa aeróbica puede detectar el grado en que los alimentos están contaminados por microorganismos.
2. Procedimiento del método de cuenta de placas aeróbicas
3. Cálculo de cuenta de placas aeróbicas
3.1 Use una lupa o un contador automático de colonias para observar y contar las colonias en el medio de cultivo en placa.
3.2 Expresado como "unidades formadoras de colonias, CFU".
3.3 Seleccione el medio de cultivo en placa con colonias entre 30 CFU a 300 CFU sin colonias anormales para contar el número de colonias. Las placas por debajo de 30 CFU se registraron en recuentos de colonias verdaderas, y las placas por encima de 300 CFU se registraron como "demasiado numerosas no puede contar (TNTC)". El número de colonias para cada grado de dilución será el promedio de dos placas.
3.4 Fórmula de cálculo: N = ∑c / [(1 × n1) + (0.1 × n2)] × d
En la formula:
N ---- el número de colonias por gramo o mililitro de la muestra;
∑c ---- la suma del número de colonias en la placa que se pueden contar;
n1 ---- el número de placa que se puede contar en el primer grado de dilución;
n2 ---- el número de placa que se puede contar en el segundo grado de dilución;
d ---- La dilución más baja del recuento.
4. Precauciones para cuenta de placas aeróbicas
(Haga clic en la fuente azul para navegar en otra página y ver la introducción relevante)
4.1 Todas las herramientas que entren en contacto con el contenido de la muestra deben esterilizarse con Esterilizadores de autoclave de laboratorio horizontales o Esterilizadores de autoclave de laboratorio verticales.
4.2 La operación de la muestra abrir o después de abrir la tapa se llevará a cabo en un ambiente limpio de aire, es decir, una operación aséptica. La operación aséptica se puede realizar en un laboratorio estéril (sala limpia) o en bancos limpios.
4.3 Si el contenido es una mezcla de sólidos y líquidos, colóquelos en las Bolsas de homogeneizar de muestra estériles, selle la bolsa, golpee con homogeneizadores estériles, rompe los sólidos de los contenidos y luego inspeccione.
4.4 Si el contenido es de múltiples líquidos y desea agitar de manera uniforme, use un Mezclador de agitador magnético con temporizador y placa calefactora, o use un Mezclador de agitador magnético de 4 cabezales con placa calefactora, o use Incubadoras multifuncionales de agitador orbital de bandeja para laboratorio, para asegurarse de que no haya microorganismos contaminantes al agitar.
4.5 Se requiere una prueba en blanco (prueba de muestra que no hay microbiológica). Cuando la prueba en blanco también tiene microorganismos, indica que hay un problema con la operación de prueba y el resultado no es creíble.
5. Preparación del medio de agar para cuenta de placa aeróbica
5.1 Ingredientes
Triptona 5,0 g
Extracto de levadura 2,5 g
Glucosa 1,0 g
Agar 15,0 g
Agua destilada 1000 ml
5.2 Método de producción
Agregue los ingredientes anteriores al agua destilada y hierva para disolver. Ajuste el pH a 7.0 ± 0.2. Colóquelos en tubos de ensayo o matraces cónicos, cúbralos con tapones de algodón y esterilice en autoclave a 121 °C durante 15 min.
6. Nota
La mayoría de los países tienen disposiciones para la cuenta de placas aeróbicas, pero las regulaciones para cada país pueden variar. Este artículo se refiere principalmente a las especificaciones de cuenta de placas aeróbicas relevantes de la República Popular de China.
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